产品货号：
SYA115
中文名称：
布鲁氏杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
48次/盒
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒适用于检测头部、乳腺、生殖器淋巴结、脾、怀孕后期或生产后早期的子宫、乳房组织、流产的胎儿组织、胎膜、阴道分泌物、精液、关节炎和水囊瘤液等样本中的布氏杆菌(BS)，用于布氏杆菌(BS)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
本试剂盒用一对布氏杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对布氏杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
试剂盒组成：
储存条件：-20℃以下，有效期6个月。
使用方法：
一、样品采集：死亡或扑杀动物，取头部、乳腺、生殖器淋巴结、脾、怀孕后期或生产后早期的子宫、乳房组织、流产的胎儿组织、胎膜、阴道分泌物、精液、关节炎和水囊瘤液。
二、样品处理：
?组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；
?阴道拭子样品、精液、关节炎和水囊瘤液直接取100μL于1.5mL灭菌离心管中。
三、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
四、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BS-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BS-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
五、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
?阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
?阳性对照(BS-PTC)：均产生扩增曲线。
?以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
?在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明BS核酸阳性。
?Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明BS核酸阴性。
?如果35＜Ct值，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
?对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行BS qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明BS核酸阳性；否则判为样本阴性。
六、注意事项：
?初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
?所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
?PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
?样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
?试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
相关搜索：布鲁氏杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
本试剂盒用一对布氏杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对布氏杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
试剂盒组成：
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 布氏杆菌反应液(BS-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 布氏杆菌阳性对照(BS-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件：-20℃以下，有效期6个月。
使用方法：
一、样品采集：死亡或扑杀动物，取头部、乳腺、生殖器淋巴结、脾、怀孕后期或生产后早期的子宫、乳房组织、流产的胎儿组织、胎膜、阴道分泌物、精液、关节炎和水囊瘤液。
二、样品处理：
?组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；
?阴道拭子样品、精液、关节炎和水囊瘤液直接取100μL于1.5mL灭菌离心管中。
三、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
四、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BS-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14μL | N×14μL |
| 酶液 | 1μL | N×1μL |
| 总量 | 15μL | N×15μL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BS-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
五、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
?阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
?阳性对照(BS-PTC)：均产生扩增曲线。
?以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
?在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明BS核酸阳性。
?Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明BS核酸阴性。
?如果35＜Ct值，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
?对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行BS qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明BS核酸阳性；否则判为样本阴性。
六、注意事项：
?初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
?所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
?PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
?样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
?试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
相关搜索：布鲁氏杆菌单重荧光PCR检测试剂盒